凡是混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能完全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。

常見污染類型

1. 細(xì)菌污染

特征：大小在0.5~5 μm，比動物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時爆發(fā)式增殖；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動。

處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。

2. 真菌污染

特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫，僅對局部細(xì)胞影響較大，其他地方生長正常。會形成孢子，容易污染其他細(xì)胞。

處理方法：真菌污染較難根除，不建議保留，建議消殺后丟棄。

3. 支原體污染

特征：最小的微生物，無法通過光學(xué)顯微鏡看見，但可通過電鏡觀察到。感染支原體的細(xì)胞，在某一時間點(diǎn)碎片突然增多，隨著傳代，細(xì)胞狀態(tài)顯著變差。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細(xì)胞房其他細(xì)胞。

鑒定方法：PCR法、顯色法、熒光染色法等。

處理方法：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

4. 黑膠蟲污染

特征：無明確定義，鏡下無法直接觀察到。主要表現(xiàn)為細(xì)胞狀態(tài)差，黑點(diǎn)和碎片多，布朗運(yùn)動。通過檢測發(fā)現(xiàn)主要為支原體污染，部分為未知的增殖不明顯的微生物污染。

處理方式：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加黑膠蟲/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

5. 細(xì)胞交叉污染

特征：即不同的細(xì)胞混雜在一起

鑒定方法：同種屬：STR鑒定，多等位基因數(shù)大于3個。

不同種屬：PCR法，對種屬特異性基因進(jìn)行擴(kuò)增，不同種屬產(chǎn)物大小不同。

處理方法：建議重新引種。

以上是常見的細(xì)胞污染的類型及處理方法，希望大家牢記并能對后續(xù)實(shí)驗(yàn)有所幫助。

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