PCR 和 qPCR 都是用于擴增 DNA 特定片段的聚合酶鏈式反應技術。兩者之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實時方法，而PCR 不是。

這意味著通過 qPCR，您可以實時監(jiān)控目標 DNA 的擴增情況。本指南將向您介紹這兩種方法并解釋它們之間的主要區(qū)別。

什么是PCR？

PCR（聚合酶鏈式反應）是一種實驗室技術，由 Kary Mullis 在 20 世紀 80 年代開發(fā)，如今用于從少量 DNA 產生大量 DNA。

PCR 通常是其他過程中使用的步驟，例如 DNA 測序、病原體檢測和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術，常用于病毒學、微生物學、寄生蟲學、真菌學和牙科等領域。  

聚合酶鏈式反應 (PCR) 是一種用于制備 DNA 特定片段的多個副本的方法。這個過程從少量模板 DNA 開始，然后通過稱為聚合酶的酶進行復制。 通過重復加熱和冷卻循環(huán)可以增加復制的數(shù)量，這會分離 DNA 鏈，以便它們可以再次復制。

PCR 的最終產物是目標 DNA 序列的大量相同副本。然后該產品可用于進一步分析，例如測序或 Southern 印跡。 PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

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什么是 qPCR（實時 PCR）？

定量聚合酶鏈式反應（qPCR 或定量 PCR）與 PCR 非常相似，但它還允許您量化樣品中存在的目標 DNA 的量。qPCR 涉及在擴增過程中添加與目標 DNA 結合的熒光染料或探針。 當這些探針被激光激發(fā)時，它們會發(fā)出不同波長的光。

通過測量每個波長發(fā)出的光，您可以確定在擴增開始之前樣品中存在多少目標 DNA。qPCR 還可用于通過測量熒光隨時間的增加來實時監(jiān)測擴增進度。

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什么是逆轉錄PCR？

逆轉錄 PCR (RT-PCR) 是一種 PCR，用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。RT-PCR 通常用于檢測和定量 RNA 病毒，例如 HIV 和丙型肝炎。

要進行 RT-PCR，您首先需要使用逆轉錄酶將 mRNA 模板逆轉錄為 cDNA。然后您可以使用 PCR 來擴增您的目標 cDNA 序列。 RT-PCR 是一種非常靈敏的方法，可用于檢測樣品中極低水平的 RNA 病毒。

qPCR 具有測量基因表達的能力。在基因表達中，當讀取一段 DNA 時，就會合成 mRNA，然后使用 mRNA 來生產蛋白質。

在逆轉錄過程中，逆轉錄酶可用于創(chuàng)建互補 DNA (cDNA)，這將是所研究的 RNA 的副本。然后對 cDNA 進行 qPCR，以準確測量產生的量。

RNA 可用于 PCR 和 qPCR，如果 RNA 用于 PCR，則稱為 RT-PCR，如果 RNA 用于 qPCR，則稱為 qRT-PCR。  

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PCR 和 qPCR 之間的差異

PCR 和 qPCR 之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實時方法，而 PCR 不是。這意味著通過 qPCR，您可以實時監(jiān)控目標 DNA 的擴增情況。

兩種方法之間的另一個區(qū)別是 qPCR 需要使用熒光染料或探針，而 PCR 則不需要。這些探針可讓您定量樣品中存在的目標 DNA 的量。

• PCR 通常用于擴增 DNA 以進行測序或其他下游應用。
• qPCR 通常用于檢測和定量 RNA 病毒。
• RT-PCR 是 PCR 的一種，用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

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PCR 和 qPCR 的應用和用途

聚合酶鏈式反應

PCR 是一個相對簡單的過程，可以檢測DNA 是否存在。PCR 應用于許多不同的領域，包括法醫(yī)學、醫(yī)學和生物技術。 它經(jīng)常用于擴增小片段 DNA 以進行測序或其他下游應用。

PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

定量PCR

qPCR 提供測量反應速率的實時數(shù)據(jù)，提供有關任何給定時間樣本中存在的 DNA 數(shù)量的 信息，本質上，它能夠測量基因表達速率。

在分子生物學中，這有助于理解蛋白質合成，從而有助于理解健康和疾病的生物途徑。實時或 qPCR 可用于檢測基因表達、病原體和 RNA 的存在和數(shù)量，以及驗證 DNA 微陣列結果和環(huán)境應用。  

qPCR 具有高通量和更寬的動態(tài)范圍的優(yōu)點，因為它可以在同一孔內檢測廣泛的表達水平。由于其多重功能，可以在同一實驗中擴增多個目標、高通量和快速結果，因此運行起來更加經(jīng)濟。  

逆轉錄聚合酶鏈反應

RT-PCR 是 PCR 的一種，用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。RT-PCR 通常用于檢測和定量 RNA 病毒，例如 HIV 和丙型肝炎。

PCR 和 qPCR 都是具有許多不同應用的重要方法。

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用于 PCR 和 qPCR 的設備

有許多不同類型的設備可用于 PCR 和 qPCR。最常見的設備類型是熱循環(huán)儀 ，它用于加熱和冷卻樣品以使 DNA 擴增發(fā)生。

其他常見類型的設備包括逆轉錄酶、熒光染料或探針以及激光器。根據(jù)您的具體應用，您可能還需要其他類型的設備。

PCR 和 qPCR 是許多不同領域中使用的重要方法。通過了解它們之間的主要區(qū)別，您可以為您的特定應用選擇最佳方法。

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結論

總之，PCR 和 qPCR 都是用于擴增 DNA 特定片段的方法 。

然而，qPCR 是一種實時方法，可讓您實時監(jiān)控目標 DNA 的擴增情況，而 PCR 則不然。最終，這兩種方法都可用于生成目標 DNA 序列的多個副本以供進一步分析。

qPCR是核酸擴增、表征、定量和分析的最佳選擇。與熒光染料一起使用，非常適合與光學技術一起使用，因此 必須使用 優(yōu)質、透明的微孔板 和膠片 。查看我們的 qPCR 產品系列 。  

PCR還用于擴增和檢測短 DNA 序列，用于后續(xù)分析，例如凝膠電泳。微孔板 和膠片不需要透明，因為 PCR 不用于光學應用。

然而，建議選擇長期   可靠且耐用的 優(yōu)質微孔板。

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