在體內(nèi)，細胞受到高度進化和復(fù)雜的免疫系統(tǒng)的保護。一旦從組織中分離出來，培養(yǎng)中的細胞就 "自生自滅"。因此，我們必須用謹慎的無菌技術(shù)來保護它們，以防止它們被存在于我們周圍，包括實驗室內(nèi)的微生物所污染。

存在各種類型的污染：例如，細胞可能被細菌、支原體或霉菌所污染。其中一些比其他的更難發(fā)現(xiàn)（如支原體），因此會在你不知不覺中對你的結(jié)果產(chǎn)生巨大影響。其他的會很明顯，會迫使你中斷你的實驗--這就浪費了時間、精力和金錢。實驗室里的污染對科學(xué)家來說可能是一場噩夢，特別是它們可以從一個樣品擴散到存在于同一培養(yǎng)箱或罩子里的所有其他樣品。因此，對于實驗室的每個人來說，盡可能地小心謹慎是一項重要的責任，不僅是為了他們自己的實驗，也是為了其他人的實驗。

防止污染的措施有很多，應(yīng)該在整個處理過程中應(yīng)用。隨著經(jīng)驗的積累，這些措施已成為第二天性，但仍然很容易犯不自覺的錯誤。雖然細胞培養(yǎng)領(lǐng)域正朝著更高的自動化水平發(fā)展2，部分原因是為了防止細胞污染，但到今天為止，我們?nèi)匀恢饕揽渴止趧?，這為無菌處理提供了許多犯錯的機會，特別是對初學(xué)者來說。在此，我們提供一些必要的提示，以保持無菌環(huán)境，防止細胞培養(yǎng)污染。

1.戴手套，實驗室涂層并使用引擎蓋

毋庸置疑，您必須在細胞與您的實驗室（或?qū)嶋H上您自己）之間提供障礙。 使用手套，實驗室涂層和引擎蓋就是這樣做的。 僅在細胞培養(yǎng)實驗室內(nèi)使用實驗室，并經(jīng)常清潔它們。 確保經(jīng)常維修引擎蓋，以確保其正常工作。 請注意，有不同類型的引擎蓋，具體取決于您想要的細胞和用戶的保護水平。

2.正確使用引擎蓋

擁有引擎蓋不足以確保無菌環(huán)境：您必須正確使用它。 首先，確保您不會阻止引擎蓋內(nèi)的空氣流：請勿將材料放在空氣插座或經(jīng)常在引擎蓋內(nèi)部長凳空間的前后發(fā)現(xiàn)的空氣插座或入口上。 此外，請確保您在引擎蓋內(nèi)部工作良好，并且不太靠近邊緣，以確保您實際上在無菌條件下運行。 您可能需要在一天結(jié)束時清空引擎蓋，并確保在每次使用前后都用70％的乙醇或70％的IMS擦除它。 一些小組選擇在引擎蓋內(nèi)有廢物處理垃圾箱，如果這樣做，將其清空并經(jīng)常清潔。 其他人則寧愿不這樣做，并將其放在引擎蓋外面，因為在引擎蓋內(nèi)使用了很長時間使用材料或試劑會增加污染的風(fēng)險。 最后，引擎蓋通常帶有紫外線光：在一天結(jié)束時打開它，以在不使用罩時對引擎蓋進行消毒。

3.定期清潔孵化器和水浴

一些新的孵化器具有自我清潔能力 - 其他孵化器必須手動清潔。 經(jīng)常這樣做； 該協(xié)議將根據(jù)孵化器而變化。 如果您在孵化器內(nèi)使用一盤水，請經(jīng)常更換水。 您有時可能需要在水中添加化學(xué)物質(zhì)以防止污染（始終檢查該化學(xué)物質(zhì)是否與托盤制成的材料兼容）。 同樣，您的水浴中的水應(yīng)定期更換媒體。 每次更改時，都要添加水浴處理。

4.用乙醇或IMS噴灑所有東西

乙醇通常用于殺死細菌。 確保使用70％的乙醇與水混合，而不是濃度較低。 已知水會增加乙醇在殺死細菌和一些病毒中的功效。 用乙醇噴灑您的手套和帶動引擎蓋的所有東西。 重要的是要意識到，每當您觸摸引擎蓋之外的東西時，都應(yīng)該再次噴上手套，然后將其放回引擎蓋中。 這適用于可能沒有引起注意的自動主義，例如移動椅子，將東西扔到引擎蓋外或觸摸眼鏡。 購買防乙醇標記來標記您的實驗室，否則將乙醇噴灑在上面可以消除您的標簽。

5.最大程度地減少細胞暴露于非疾病環(huán)境

由于付出了很大的努力，致力于維持孵化器和引擎蓋內(nèi)部的無菌環(huán)境，因此請確保您最大程度地減少了細胞在這些環(huán)境之外的時間。 例如，當您在顯微鏡下檢查它們時，或?qū)⑺鼈儚姆趸鬓D(zhuǎn)移到引擎蓋時。 如果您必須在非緊密的條件下長時間使用細胞，例如在延時成像期間，并且需要將細胞重新放回孵化器中，請在可能的情況下為此目的指定單獨的孵化器。 這樣，增加的污染風(fēng)險將僅限于一個孵化器。

6.購買無菌試劑并保持無菌！

確保購買無菌的試劑。 這包括媒體，PBS或任何其他將與細胞接觸的產(chǎn)品。 如果您將試劑用于其他未無菌的作品，例如抗體，請不要將其用于細胞培養(yǎng)。 保留兩種單獨的無菌和非菌株試劑。 此外，您還可以選擇通過去除細菌的膜過濾培養(yǎng)基（或任何其他液體試劑）。 通常，0.2μm過濾器足以阻斷細菌。 維持試劑無菌性的另一種方法是將其等分。 這樣，如果一個等分試樣被污染了整個股票，則不受影響，您可以丟棄一個等分試樣而不是整個股票。 您也可以購買預(yù)級試劑。

7.使用無菌實驗室

除了試劑外，您還必須對細胞接觸的實驗室進行消毒。 為了對其進行消毒，您可以使用高壓鏟機。 但是，請確保您的實驗室可以被高壓滅菌！ 并非所有材料都能維持高壓釜的溫度。 例如，科學(xué)家經(jīng)常進行高壓滅絕移液器或移液器提示。 如果可以的話，購買已經(jīng)無菌的消耗品，例如燒瓶。 為了保持不育，只有將燒瓶袋噴涂并將其噴涂并將其放入引擎蓋中。 完成后，將袋子在引擎蓋內(nèi)關(guān)閉，然后再將其帶回外面。 如果用膠帶將袋子密封，并且膠帶在引擎蓋外，請用手將袋子閉合，直到膠帶膠帶為止。 如果您的實驗室中有過濾水的來源，也可以自壓水。 將壓力敏感的膠帶放在材料上之前，將其放在高壓滅菌器中：如果材料成功地被高壓滅菌和消毒，則膠帶應(yīng)更換顏色。

8.經(jīng)常使用并更換濾芯吸頭

包含過濾器的移液尖端阻止尖端內(nèi)部的溶液接觸移液器。 如果沒有過濾尖端，您的移液可能會被污染，從而污染其首先接觸的其他所有樣品，這意味著，如果一個樣品被微生物污染，則可以擴散到其他樣品中，但這也可能意味著您可以非自愿地從一個樣品中引入細胞 樣本到另一個。 出于同樣的原因，請確保在實驗期間經(jīng)常更改技巧，尤其是在樣品之間。 當您使用移液器操作時，請小心，以免將 移液器吸頭與其他任何東西直接接觸，如果您確實更換了吸頭。 重要的是，如果您想從瓶子里放東西，請避免使用必須在瓶中插入的移液器，以防止移液器直接觸摸瓶子的內(nèi)部：而是使用可以使用更長的移液槍 可以在瓶子內(nèi)部深入的移液。

9.經(jīng)常檢查細胞

即使某些污染（例如與支原體相關(guān)的污染）很難在視覺上檢測到，但在顯微鏡下定期檢查細胞始終是明智的。 如果這樣做，請盡量不要將細胞遠離孵化器，以最大程度地減少污染風(fēng)險。 您可以檢查運動細菌（不要與細胞碎片混淆！），形態(tài)變化或異常增殖率。 如果您懷疑您的樣品被支原體污染，則可以使用商業(yè)套件來確認這一點。

10.漂白您的污染樣品

如果您確實認為樣品被污染了，請在水槽中填充10％的漂白劑，三角洲或克洛斯，或者遠離孵化器一段時間。 將其倒入水槽內(nèi)，扔掉文化船。 如果您意識到樣品被污染了，請警告您的Labmates，尤其是那些在同一孵化器中有樣品的人！ 這確實很重要，它可以讓他們迅速做出反應(yīng)，檢查樣本是否正常，并相應(yīng)地計劃。 如果可以清空其所有樣品的孵化器，請清潔孵化器。

11.使用良好的標簽練習(xí)

保留細胞補充劑和媒體庫存的良好記錄將幫助您更快地識別污染源。 如果發(fā)現(xiàn)某些單元被污染，則應(yīng)能夠識別這些單元所屬的庫存并測試污染是否對整個庫存是共同的。 同樣，如果您知道所使用的媒體或補充劑，則可以檢查或扔掉受影響的股票以避免重復(fù)污染。 良好的標簽還可以防止其他細胞類型對實驗污染：您想確保在測定中所擁有的單元格是您認為它們的細胞。 這是該領(lǐng)域的一個巨大問題，使用錯誤的細胞系進行了多達30,000個研究。4。 因此，請確保正確標記所有燒瓶和小瓶，以最大程度地減少樣品之間交叉污染的可能性。

12.常識

最后但并非最不重要的一點是，常識可以防止污染。 例如，請勿在細胞培養(yǎng)實驗室中使用細菌或霉菌進行工作。 不用說，不應(yīng)在細胞培養(yǎng)孵化器中放置任何包含細菌的樣品。 如果您生病了，請盡量避免繼續(xù)細胞培養(yǎng)工作。 最小化在開放式孵化器面前或在引擎蓋上工作時交談。 不要將孵化器門打開太久。 在細胞文化處理前后，洗手！