細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境，使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要用到各種細(xì)胞培養(yǎng)耗材，其中細(xì)胞培養(yǎng)瓶是使用量比較大的一種。

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以， 而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

操作步驟

1. 吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的舊培養(yǎng)液。

2. 向瓶?jī)?nèi)加入少許胰蛋白酶和EDTA 混合液，以能覆滿瓶底為限。

3. 置恒溫箱中 2~5 分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。

4. 吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入 Hanks 液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加 Hanks 液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用 Hanks 液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

5. 用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。

6. 計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置恒溫箱中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1、 操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后要用 75%酒精或 0.2%新潔爾滅擦試雙手。試劑等瓶口也要擦試。

2、 點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(zhǎng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。

3、操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。

4、不能用手接觸已消毒器皿的工作部分，工作臺(tái)面上用品要布局合理。

5、 瓶子開(kāi)口后要盡量保持 45℃斜位。

6、 吸溶液的吸管等不能混用。

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