了解移液不當?shù)母鞣N細微差別是確保準確性和精密度的最關鍵要素之一,特別是在人員流動率較高、實驗室工作量不斷增加和測試日益復雜的情況下。應記錄完整的培訓方案并包括定期的能力評估,即使這不是監(jiān)管要求。整個實驗室工作人員持續(xù)采用一致的移液技術可確保測試結果的一致性。
對于熟練的人來說,正確校準的移液器是一種準確且精密的儀器。然而,與任何精密儀器一樣,技術不當會對測試結果產(chǎn)生負面影響。
1. 在液體處理步驟之前將移液器吸頭 預濕 3 次
預潤濕可增加吸頭內(nèi)的濕度,減少轉移樣品的蒸發(fā)。
2. 吸液時保持在半月板下方 2-6 毫米處
預潤濕時,確保不要將移液器吸頭浸入溶液中太深,以避免液滴粘在吸頭的外表面。
3.在移液器、溶液和空氣之間的溫度平衡下工作
移液器容易受到分配樣品溫度變化的影響。冷液體往往會輸送過量,而熱液體可能會輸送比預期更少的體積。除非另有說明,否則使用前請留出足夠的時間讓移液器和液體的溫度達到平衡。
4. 在移液步驟之間使用移液器支架
盡量減少對移液器和吸頭的操作,以避免體溫傳遞到移液器。溫度傳遞使移液器和吸頭內(nèi)的空氣膨脹,從而導致吸入的樣品體積發(fā)生變化。因此,建議在移液步驟之間使用移液器支架。
5. 分配樣品前檢查吸頭
檢查吸頭外表面是否有液滴可以避免移液體積錯誤。如果發(fā)現(xiàn)水滴,請用無絨布仔細擦拭,避開尖端孔口。
6.了解標準和反向模式移液的使用
對水溶液使用標準模式移液,對粘性溶液使用反向模式移液,可避免因樣品性質(zhì)而產(chǎn)生的移液誤差。
7. 抽吸后持續(xù)暫停
抽吸后,當吸頭仍在溶液內(nèi)時,持續(xù)暫停,以使吸頭內(nèi)的液體穩(wěn)定。
8. 將移液器筆直拉出
抽吸后,確保避免吸頭接觸容器表面,并將其筆直拉出。在移取小體積樣品時,表面張力是要避免的特別重要的因素,否則可能會導致樣品體積不一致。
9.使用正確的移液器吸頭
移液器和吸頭之間的不匹配可能會導致移液器和吸頭之間的密封不當,從而最大限度地減少樣品損失。施加太大的壓力可能會導致?lián)p壞吸頭并改變樣品體積。
10.使用一致的柱塞速度和壓力
緩慢而穩(wěn)定地按下和釋放柱塞,以確保分配體積的一致性。緩慢而小心地操作柱塞可以避免由于移液時空氣柱置換液體而產(chǎn)生的錯誤。
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