經(jīng)常做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的你，想必一定遇到過這個(gè)難題：細(xì)胞收集，究竟哪種方案最合適？

離心收集or瓶內(nèi)裂解or胰酶消化？今天，跟著小岳一起來了解一下細(xì)胞收集方法的優(yōu)劣對比及操作步驟!

1、離心法

優(yōu)點(diǎn)：離心法操作方便，同時(shí)我們可根據(jù)收集到的細(xì)胞沉淀來加入適量的裂解液，從而能夠控制樣品蛋白的濃度。

缺點(diǎn)：在離心過程中卻容易造成細(xì)胞破碎而降低總蛋白得率，同時(shí)會(huì)造成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的丟失，從而造成樣品蛋白質(zhì)圖譜的不完整。

（注：細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是由細(xì)胞外大分子和礦物質(zhì)（如膠原蛋白、酶、糖蛋白和羥基磷灰石）組成的三維網(wǎng)絡(luò)，為周圍細(xì)胞提供結(jié)構(gòu)和生化支持。因?yàn)槎嗉?xì)胞在不同的多細(xì)胞譜系中獨(dú)立進(jìn)化，細(xì)胞外基質(zhì)的組成因多細(xì)胞結(jié)構(gòu)而異；然而，細(xì)胞粘附、細(xì)胞間通訊和分化是ECM的常見功能。細(xì)胞外基質(zhì)主要由5類物質(zhì)組成，即膠原蛋白、非膠原蛋白、彈性蛋白、蛋白聚糖與氨基聚糖，按分布部位劃分主要分為基底膜（Basement membrane）和間質(zhì)基質(zhì)(Interstitial matrix)）

2、瓶內(nèi)裂解法

優(yōu)點(diǎn)：瓶內(nèi)裂解法最大的優(yōu)點(diǎn)是可以有效的防止細(xì)胞在離心過程中破碎，能有效的提高總蛋白得率，同時(shí)也能完整的保留細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。

缺點(diǎn)：操作會(huì)相對復(fù)雜，且不易控制加入的裂解液量，往往會(huì)造成總蛋白濃度低且粘度高等情況；對于一些藥物處理的細(xì)胞和貼壁不牢的細(xì)胞，使用此方法在清洗階段也容易造成細(xì)胞大量丟失。

3、胰酶消化法

優(yōu)點(diǎn)：胰酶處理的細(xì)胞個(gè)體形態(tài)單一，不聚團(tuán)，對細(xì)胞損傷小。

缺點(diǎn)：會(huì)造成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的完全丟失，同時(shí)會(huì)剪切一些對胰酶敏感的蛋白。

對于WB蛋白樣品中是否含有對胰酶敏感的蛋白，我們往往不太確定，同時(shí)胰蛋白酶也屬于外來蛋白質(zhì)，如果不能做到徹底清除，同樣會(huì)污染我們的樣本。所以用于WB的細(xì)胞樣品不建議使用胰酶消化法收集細(xì)胞。

每一種方法都有自己的優(yōu)勢和局限性，我們要根據(jù)自己的細(xì)胞類型選擇合適的細(xì)胞收集方式。

離心法：適用于懸浮細(xì)胞、貼壁不牢和藥物處理過的細(xì)胞；

瓶內(nèi)裂解法：適用于所有的貼壁細(xì)胞；

胰酶消化法：適用于目的蛋白非細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）或?qū)σ让覆幻舾械牡鞍住?

在一般情況下，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)會(huì)首推瓶內(nèi)裂解法，其次離心法；不推薦胰酶消化法。